หลังจากที่ทีมประสบความสำเร็จ ในการครองแชมป์กีฬาแห่งชาติเมื่อปี (ภาค) ที่แล้ว ก็เกิดการแตกแยกกันของทีม โดยที่ โหน่ง (โจโจ้ ไมอ๊อคชิ), เอพริล (เอ - พรหมสิทธิ์ สิทธิจำเริญคุณ), เมย์ (บี - สุทธิพงศ์ สิทธิจำเริญคุณ), จูน (น๊อต - อนุชา ฉัตรแก้ว) ได้แยกตัวออกไปสร้างทีมวอลเล่ย์บอลกะเทย และมี หน่อง (ปีเตอร์ ไมอ๊อคชิ) กะเทยน้องใหม่ มาเป็นคู่หูคนใหม่ของโหน่ง ภายใต้สังกัดของสโมสร โดยมี อากู๋ (วิเชียร ฤกษ์ไพศาล) เป็นผู้ดูแลทีม เพราะข้อเสนอและผลประโยชน์ทางธุรกิจต่างๆ ทำให้ทีมของโหน่งเติบโต และประสบความสำเร็จอย่างรวดเร็ว ในขณะที่ทีมสตรีเหล็กเดิมที่เหลือ จุง (ป๋อม - ชัยชาญ นิ่มพูลสวัสดิ์), มล (ต่อ - สหภาพ วีระฆามินทร์), ชัย (ติ๊ก - เจษฎาภรณ์ ผลดี) ยังคงเล่นวอลเล่ย์บอลต่อไป

ทั้งสองทีมได้มาเจอกันอีกครั้ง ในการแข่งขันชิงถ้วยคิงส์คัพในปีนี้ ปรากฎว่าทีมสโมสรชนะทีมสตรีเหล็กไป 3 เซ็ทรวด ตลอดการแข่งขัน โหน่งได้ปะทะคารมกับจุงอยู่ตลอดเวลา และเมื่อโหน่งมีชัยชนะเหนือทีมจุง ยิ่งทำให้โหน่งได้ใจ และหลงระเริงในชื่อเสียงและความสำเร็จ ทำให้จุงที่โกรธโหน่ง จากการแยกตัวจากทีมไปเป็นทุนเดิมอยู่แล้ว ยิ่งโกรธและโมโหโหน่งเข้าไปใหญ่ จุงจึงมีแผนชวนชัยไปหา เปีย (โกโก้ - กกกร เบญจาธิกูล) ที่สิบสองปันนา เพื่อเล่าเรื่องราวทั้งหมดให้เปียฟัง เผื่อเปียจะมีทางออกดีๆ ให้กับจุงได้บ้าง

ตลอดการเดินทางไปสิบสองปันนา เป็นไปอย่างทุลักทุเล ทั้งขึ้นเรือ ลงรถ หลงทาง ทำให้จุงได้คิดถึงเรื่องอดีต และระลึกถึงความสุข ครั้งเมื่อก่อตั้งทีมสตรีเหล็กให้ชัยฟัง...

ย้อนไปเมื่อปี 2532 จุงเข้าเรียนที่รามฯ เป็นที่มาของการก่อตั้งทีมสตรีเหล็ก จุงได้เจอ แอน (โอ๋ - หทัยรัตน์ เจริญชัยชนะ) เพื่อนผู้หญิงนมตู้มแต่เป็นทอม ที่ใฝ่ฝันจะเป็นผู้จัดการทีม คอยส่งข้าวส่งน้ำให้ทีม ตอนอยู่ชมรมวอลเลย์รามฯ ที่นี่จุงได้เจอมลเพื่อนร่วมชมรม รวมทั้งโหน่ง รุ่นพี่ที่แสดงทีท่าไม่ชอบจุงตั้งแต่แรกเจอ จุงและโหน่ง (ที่ตอนนั้นยังเป็นชายทั้งแท่งอยู่) มักปะทะคารมกันเสมอ เพราะต่างคนต่างหลงรัก วิทย์ (โต้ง - อภิชาต วงษ์กาวี) รุ่นพี่ที่ชมรม ก็ไม่มีใครรู้ว่าเป็นกะเทยเหมือนกัน จนในที่สุดความจริงก็เปิดเผย ทั้งโหน่งและวิทย์ ต่างก็ยอมรับที่ตัวเองเป็นกะเทยทั้งคู่ สุดท้ายเปีย เจ๊คนสวยข้างห้อง ที่เพิ่งถูกผู้ชายทิ้งมาหมาดๆ มาสมทบเป็นเพื่อนร่วมก๊วนอีกหนึ่งคน

ความหลังครั้งก่อนจากปากคำของจุง ระหว่างทางไปสิบสองปันนา ทำให้ชัยเสียดายมิตรภาพ ระหว่างเพื่อนของทีมสตรีเหล็ก ซึ่งระหว่างทางนั้นเอง จุงและชัยเกิดหลงทาง ทำให้ต้องโบกรถไป ปรากฎว่ารถที่โบก เป็นรถทะเบียนไทยที่มี มล เอพริล เมย์ จูน และโหน่ง อยู่ในรถด้วย สร้างความประหลาดใจ ให้กับจุงกับชัยเป็นอย่างมาก ก่อนจะงงไปมากกว่านี้ มลได้อธิบายว่า ทีมสโมสรได้ดึงเมืองแมนมารวมทีม เพื่อความแข็งแกร่งของทีม ทำให้โหน่งไม่พอใจ และเสียใจเหมือนถูกหักหลัง โหน่งจึงขอให้มล พามาเพื่อตามหาเพื่อนๆ ที่สิบสองปันนา

พอมาถึงที่สิบสองปันนา ทั้งหมดก็ต้องประหลาดใจอีกครั้ง เพราะเจอวิทย์และ ครูบี๋ (สิริธนา หงษ์โสภณ) กำลังนั่งรอดูโชว์ของเปียอยู่ ทุกคนจึงเข้าใจว่า ทั้งหมดเป็นแผนของเปียนั่นเอง ที่อยากให้เพื่อนๆ ได้มาเจอกันอีกครั้ง

ที่นี่ทีมสตรีเหล็กได้รับการต้อนรับ จากคนที่นี่อย่างมาก ทีมสตรีเหล็กได้ถูกเชิญโดย ด๋อย (ทุเรียน - สุพจน์ พงษ์พรรณเจริญ) หนุ่มจีนหน้าซื่อแฟนใหม่ของเปีย ซึ่งเป็นผู้ว่าการกีฬาของเมืองนี้ ไปเล่นวอลเลย์กระชับมิตร กับทีมที่สิบสองปันนา ทำให้ความรู้สึกดีๆ กลับคืนมา โดยเฉพาะจุงกับโหน่ง ได้มีโอกาสปรับความเข้าใจกัน ทั้งทีมได้กลับมาเป็นทีมอีกครั้ง เพื่อเป็นตัวแทนให้จังหวัดลำปาง ในการแข่งขันคัดเลือกตัวแทนเขต 5 ซึ่งคู่แข่งของทีมสตรีเหล็ก ก็ไม่ใช่ใครที่ไหนเลย ถ้าไม่ใช่ทีมสโมสรที่มีเมืองแมน และหน่องเป็นแกนนำนั่นเอง คราวนี้ต้องเอาใจช่วยทีมสตรีเหล็กอีกซักครั้ง ว่ามิตรภาพจะช่วยพวกเขา ฝ่าฟันอุปสรรคไปได้สำเร็จหรือไม่...

ไท เอ็นเตอร์เท็นเมนท์ และ หับโห้หิ้นฟิล์ม ภูมิใจเสนอ สตรีเหล็ก 2 บทและกำกับโดย ยงยุทธ ทองกองทุน อำนวยการผลิตโดย วิสูตร พูลวรลักษณ์, จินา โอสถศิลป์, ดูแลการผลิตโดย ชนะใจ ต้นไทรทอง, ดำเนินการผลิตโดย ชัชวรินทร์ คล้ายนาค, ประเสริฐ วิวัฒนานนท์พงษ์, จิระ มะลิกุล, กำกับภาพโดย สยมภู มุกดีพร้อม และ จิระ มะลิกุล, ลำดับภาพโดย สุนิตย์ อัศวินิกุล, ช่วยกำกับโดย ศศิวิมล ชินเวชกิจวานิชย์, ปนัดดา โพธิวิจิตร, จารุณี บุญเสก, ออกแบบงานสร้างโดย นภดล อากาศ, กำกับศิลป์โดย พุฒิพงษ์ อรุณเพ็ง, ออกแบบเครื่องแต่งกายโดย เอกศิษฐ์ มีประเสริฐกุล, ออกแบบเสียงและดนตรีประกอบโดย อมรพงศ์ เมธาคุณวุฒิ