ต้นรัชกาลที่ 5 แห่งกรุงรัตนโกสินทร์...

ปีเตอร์ เบย์น (รับบทโดย โจ สก็อต เช็พเพิร์ด) อดีตนายทหารอังกฤษจากเมืองมัณฑะเล ถูกเจ้าสัวหยาง พ่อค้าของป่าชาวจีนเมืองบางกอก จับได้ว่าเอาปืนชำรุดมาหลอกขาย จึงถูกบังคับให้ร่วมคณะ ไปกับพรานป่าของเจ้าสัวหยาง เพื่อล่าเสือด้วยปืนชำรุดเหล่านั้นให้ได้ หรือไม่ก็ถูกเสือฆ่าตาย ขณะเดียวกัน วัน (ภาณุ สุวรรณโณ) ภิกษุหนุ่มอดีตพรานป่าก็ลาสิกขา เพราะถูกวิญญาณอาถรรพ์ของเสือร้ายตัวหนึ่ง คุกคามทุกๆ ครั้งที่เขาพยายามจะนั่งกรรมฐาน

วันและปีเตอร์ต่างเดินทาง สู่หมู่บ้านกลางดงลึกใกล้แดนพม่า และพบกับ จูเลีย (สุนิสสา บราวน์) พรานสาวลูกครึ่ง สายเลือดอเมริกัน-กะเหรี่ยง โดยไม่รู้ว่า ชะตากรรมกำลังพาเขาทั้งสาม ไปพบกับนางเสือร้ายตัวหนึ่ง ซึ่งพร้อมจะเอาชีวิต

วันเข้าร่วมกับปีเตอร์ จูเลียและพรานของเจ้าสัวหยาง ออกตามล่าช้างงายาวตัวหนึ่ง ซึ่งเชื่อกันว่ามี "เสือสมิง" ให้ความคุ้มครอง ทั้งหมดพลัดเข้าสู่อาณาจักรของช้างงายาว และนางเสือร้ายที่มีดวงวิญญาณของ เนียน (ปรางทอง ชั่งธรรม) หญิงสาวผู้ถูกฆ่าตายอย่างทารุณ ระหว่างสงครามลำน้ำกษัตริย์ เมื่อเกือบร้อยปีก่อนสิงอยู่ และได้เข้าถึงใจกลางป่าลำน้ำกษัตริย์ ซึ่งเต็มไปด้วยอาถรรพ์ลี้ลับ ก่อนที่ช้างจะถูกพวกพรานยิงบาดเจ็บ

ความอาฆาตของวิญญาณเนียน ซึ่งสิงอยู่ในร่างของเสือร้าย รุนแรงถึงขนาดแปลงร่างเป็นมนุษย์ ตามไปเล่นงานผู้คนในหมู่บ้านกลางป่า อันเป็นที่ตั้งสถานียิงสัตว์ของเจ้าสัวหยาง และเมื่อจวนตัว เนียน ก็อาศัยพลังจิตอันแก่กล้า เข้าครอบงำวัน และพาวันจากไป

ปีเตอร์ และจูเลีย ตามไปช่วยวัน เมื่อวันคืนสติ เขาพยายามจะปลดปล่อยเนียน จากแรงอาฆาตของอดีต ขณะที่พวกพรานของเจ้าสัวหยาง มุ่งจะกำจัดเนียน และฆ่าช้างงางาม

ความโลภ ความอาฆาต และกรรมเก่าจากอดีตชาติ เข้ามาพัวพันระหว่างคนเหล่านั้น จนป่าลำน้ำกษัตริย์คาวคลุ้งไปด้วยเลือด และความตายอีกครั้ง...

หลังจากจับแนวหนังมาหลายแบบ คราวนี้ บัณฑิต ฤทธิ์ถกล หันมาจับแนวลึกลับเป็นครั้งแรกใน สาบเสือที่ลำน้ำกษัตริย์ โดยเริ่มต้นในช่วงสงคราม 9 ทัพ สมัยรัชกาลที่ 1 ซึ่งเป็นสงครามครั้งสุดท้าย ระหว่างไทย-พม่า แต่เป็นจุดเริ่มต้นของเหตุการณ์ ที่เกี่ยวพันกับบุคคลต่างๆ มาเรียงร้อยด้วยเส้นเชือกแห่งความโลภ อาฆาต และกรรมเก่าจากอดีตชาติ โดยมีกระแสแห่งลำน้ำกษัตริย์ นำพาชะตากรรมของคนเหล่านั้นมาเริ่มต้น และบรรจบลงด้วยความตาย

โจ สก็อต เช็พเพิร์ด (Jo Scott Sheperd) โปรแกรมเมอร์วัย 21 ปีจากอังกฤษ สวมบท ปีเตอร์ เบย์น ร้อยเอกอังกฤษจากเมืองมัณฑะเล ที่ลาออกจากกองทัพมาเร่ร่อนในบางกอก กลายเป็นขี้เมาที่หาเลี้ยงชีพ ด้วยการฝึกยิงปืนไรเพิลสมัยใหม่ ให้กับบรรดาพรานป่าของเถ้าแก่ชาวจีน

บัณฑิต ฤทธิ์ถกล ตัดสินใจเลือก ภาณุ สุวรรณโณ ผู้รับบท เสกสรรค์ ประเสริฐกุล ในภาพยนตร์ยอดเยี่ยมประจำปี 2544 เรื่อง 14 ตุลาฯ สงครามประชาชน (คนล่าจันทร์) เข้ารับบทเด่น ในภาพยนตร์เรื่องใหม่นี้อีกครั้ง โดยพลิกภาพนักศึกษาอุดมการณ์แรงกล้า มารับบทเป็น วัน ควาญช้างและพรานป่าขลังอาคม

ในบทบาทของ วัน ภาณุต้องตัดผมสั้นเกรียน เพื่อให้เหมาะกับทิดสึกใหม่ เข้ารับการฝึกใช้อาวุธปืน การเดิน และการแกะรอยสัตว์ป่า รวมทั้งเรียนรู้การบังคับช้าง โดยทีมงานจัดผู้เชี่ยวชาญเรื่องช้างจากกรมปศุสัตว์ พร้อมอุปกรณ์ อาทิ กระสุนยาสลบ คอยดูแลรักษาความปลอดภัย ตลอดการถ่ายทำ

ทีมงาน สาบเสือที่ลำน้ำกษัตริย์ เฟ้นหา 1 ใน 2 นักแสดงนำฝ่ายหญิง เพื่อสวมบทพรานสาว ลูกครึ่งอเมริกัน-กะเหรี่ยง โดยตัดสินใจเลือก สุนิสสา บราวน์ หรือ "ซันนี่" วี.เจ.สาวจากรายการ Channel V Thailand และนางแบบชื่อดัง เข้ารับบทดังกล่าว

ในบท จูเลีย ซันนี่จะต้องพูดทั้ง 3 ภาษา คือ อังกฤษ ไทย และกะเหรี่ยง รวมทั้งต้องเข้าค่ายฝึกซ้อม หรือ Workshop ก่อนถ่ายจริง เพื่อเตรียมสภาพความพร้อมของร่างกาย การเดินป่าด้วยสัมภาระบนหลัง รวมทั้งการใช้อาวุธปืนไรเฟิลรุ่นโบราณอย่างถูกต้อง

เฉพาะบท จูเลีย ถือว่าเป็นบทที่คัดเลือกนักแสดงยากที่สุด เพราะในเรื่อง จูเลีย เป็นลูกครึ่งอเมริกัน-กะเหรี่ยง จึงต้องหานักแสดงที่พูดสำเนียงอเมริกัน มีความปราดเปรียว คล่องตัว แต่ที่ผ่านมา มักจะได้ประเภทพูดสำเนียงได้ แต่บุคลิกไม่เหมาะสม หรือไม่ก็ได้บุคลิกเข้าท่า แต่สำเนียงการพูดไม่เหมาะกับบท จนลงท้ายก็มาลงตัวที่ สุนิสสา บราวน์

บัณฑิต ฤทธิ์ถกล เลือก ปรางทอง ชั่งธรรม นักศึกษาปี 2 จากเทคโนโลยีราชมงคล วิทยาเขตเพาะช่าง รับบท เนียน หญิงที่มีวิญญาณอาฆาตสิงสู่ในร่างเสือร้าย ออกเร่ร่อนตามหารักเก่าในอดีตชาติ

เพื่อให้สมบทบาท เนียน ซึ่งเป็นหนึ่งในสองนักแสดงนำฝ่ายหญิง ทางทีมงานจึงจัดติวเข้มให้กับปราง ด้วยการฝึกเลียนแบบท่าทางต่างๆ ของเสือ เช่น การเคลื่อนไหว การกระโจน และการจ้องมองเหยื่อ โดยในการถ่ายทำ จะมีการถ่ายเสือจริง รวมทั้งมีการสร้างเสือหุ่น มูลค่ากว่าล้านบาท ที่เคลื่อนไหวได้จริง เพื่อถ่ายทำผสมกันด้วยเทคนิคพิเศษ และใช้คอมพิวเตอร์กราฟฟิคในการตัดต่อ โดยเฉพาะฉากที่เนียนจะแปลงร่างจากคนไปเป็นเสือ